Rekombinant sünbül zülalına əsaslanan koronavirus IgG antikorunun kəskin diareya sindromunun aşkarlanması üçün dolayı ELISA metodunun hazırlanması

Donuz Kəskin Diareya Sindromu Koronavirusu (SADS-CoV) yeni kəşf edilmiş donuz bağırsaq patogenli koronavirusudur və yeni doğulmuş donuz balalarında sulu ishala səbəb ola bilər və donuz sənayesinə əhəmiyyətli iqtisadi itkilərə səbəb ola bilər.Hazırda SADS-CoV infeksiyasının və peyvəndin effektivliyini qiymətləndirmək üçün uyğun seroloji metod yoxdur, ona görə də bu çatışmazlığı aradan qaldırmaq üçün effektiv fermentlə əlaqəli immunosorbent analizindən (ELISA) istifadə etməyə təcili ehtiyac var.Burada insan IgG Fc domeni ilə birləşmiş SADS-CoV sünbül (S) zülalını ifadə edən rekombinant plazmid rekombinant bakulovirus istehsal etmək üçün qurulmuş və HEK 293F hüceyrələrində ifadə edilmişdir.S-Fc zülalı protein G qatranı ilə təmizlənir və anti-insan Fc və anti-SADS-CoV antikorları ilə reaktivliyini saxlayır.Sonra S-Fc proteini dolayı ELISA (S-iELISA) hazırlamaq və S-iELISA-nın reaksiya şəraitini optimallaşdırmaq üçün istifadə edilmişdir.Nəticədə, immunofluoressensiya analizi (IFA) və Western blotting ilə təsdiqlənmiş 40 SADS-CoV mənfi serumun OD450nm dəyərini təhlil edərək, kəsmə dəyərinin 0,3711 olduğu müəyyən edilmişdir.S-iELISA sınaqları daxilində və arasında 6 SADS-CoV müsbət serumunun dəyişmə əmsalı (CV) hamısı 10%-dən az idi.Çarpaz reaktivlik testi göstərdi ki, S-iELISA-nın digər donuz virusu seraları ilə çarpaz reaktivliyi yoxdur.Bundan əlavə, 111 klinik serum nümunəsinin aşkarlanması əsasında İFA və S-iELISA-nın ümumi təsadüf nisbəti 97,3% təşkil edib.Serumun 7 fərqli OD450nm dəyəri ilə virus zərərsizləşdirmə testi göstərdi ki, S-iELISA tərəfindən aşkar edilən OD450nm dəyəri virusun zərərsizləşdirilməsi testi ilə müsbət korrelyasiya olub.Nəhayət, S-iELISA 300 donuz təsərrüfatı zərdab nümunələri üzərində aparıldı.Digər donuz enteroviruslarının kommersiya dəstləri göstərdi ki, SADS-CoV, TGEV, PDCoV və PEDV-nin IgG müsbət nisbətləri müvafiq olaraq 81,7%, 54% və 65,3% təşkil edir.müvafiq olaraq , 6%.Nəticələr göstərir ki, S-iELISA spesifik, həssas və təkrarlana bilir və donuz sənayesində SADS-CoV infeksiyasını aşkar etmək üçün istifadə edilə bilər.Bu məqalə müəllif hüquqları ilə qorunur.bütün hüquqlar qorunur.


Göndərmə vaxtı: 22 iyun 2021-ci il